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有木有增加蛋白表達量的轉(zhuǎn)染試劑？ ——試試Seebio?小西家的陽離子聚合物PEI

  專題推薦     |      2023-08-01
CHO細胞和HEK-293細胞常用于哺乳動物瞬轉(zhuǎn)系統(tǒng)中快速生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的蛋白。然而，研究者在利用瞬時轉(zhuǎn)染生產(chǎn)重組蛋白時，通常會遇到蛋白表達量極低，成本高昂且操作復雜不利于放大生產(chǎn)等問題。優(yōu)質(zhì)的轉(zhuǎn)染試劑是通往優(yōu)質(zhì)蛋白生產(chǎn)瞬轉(zhuǎn)平臺的必經(jīng)之路。
自1996年開始陽離子聚合物作為基因轉(zhuǎn)染載體的研究，聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）作為化學轉(zhuǎn)染的新寵，近年來倍受關(guān)注，無論是科研還是在工業(yè)化、大規(guī)模瞬時轉(zhuǎn)染表達重組蛋白或病毒載體領(lǐng)域都是使用廣泛的轉(zhuǎn)染試劑。西寶生物開發(fā)的新一代陽離子聚合物產(chǎn)品著重優(yōu)化和DNA結(jié)合能力。為了更好的了解PEI這款陽離子聚合物產(chǎn)品，本文從PEI的分類，原理，使用及常見問題及產(chǎn)品推薦幾個方面介紹該產(chǎn)品。
PEI的分類
PEI的結(jié)構(gòu)可以寫成是-(CH2CH2NH)n-。根據(jù)合成原料與工藝的差異，產(chǎn)物有支鏈PEI與直鏈PEI的差異，2者在應用上存在比較明顯的偏好。支鏈PEI在力學性、加工性、成膜性、薄膜透光性方面更具有優(yōu)勢，廣泛應用于造紙、石油、輕紡、建筑等領(lǐng)域，而直鏈PEI在真核細胞的基因轉(zhuǎn)染方面更具有優(yōu)勢，已廣泛應用于基因轉(zhuǎn)染方面。
直鏈PEI，應用較廣泛的主要有PEI25000與PEI40000（也有稱PEIMAX），在HEK293和CHO等細胞中轉(zhuǎn)染效率較高。PEI 40000與PEI 25000轉(zhuǎn)染試劑相比，具有很多優(yōu)點。包括：
1.溶解性：PEI 40000較易溶解，可直接在水中溶解，PEI 25000需要先把水調(diào)成弱酸性助其溶解，溶解后再用NaOH把pH調(diào)至中性；
2.操作性：PEI 40000操作簡便，更易于使用，且比PEI 25000的轉(zhuǎn)染效果好；
3.穩(wěn)定性：PEI 25000含有4-11%的丙?；鶜埩?，其能阻止聚合物主鏈與DNA結(jié)合。相較于PEI 25000，PEI 40000是完全脫落的結(jié)構(gòu)，因此其性能始終高效如一。
PEI轉(zhuǎn)染的原理
陽離子聚合物轉(zhuǎn)染的共同原理：聚合物把DNA包裹形成復合物，防止被DNase降解，然后附著在細胞膜上被內(nèi)吞進入胞內(nèi)，破裂釋放后，DNA進入細胞質(zhì)中，從而發(fā)揮一定的功能。陽離子聚合物和陽離子脂質(zhì)體的主要區(qū)別在于其不含疏水部分而完全溶于水，并可以方便地進行化學修飾。
直鏈PEI單體中每3個原子含1個氮，形成胺基。每相隔二個碳原子，即每第三個原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡在pH下都能充當有效的質(zhì)子海綿(proton sponge)體。這是PEI有較強的結(jié)合DNA和黏附細胞，能作為基因轉(zhuǎn)導載體的重要原因。針對這個特點西寶生物開發(fā)的新一代陽離子聚合物產(chǎn)品著重優(yōu)化和DNA結(jié)合能力。
pH值與質(zhì)子化關(guān)系
圖1. pH值與質(zhì)子化關(guān)系（源自：doi.org/10.1021/acs.macromol.0c01501）
PEI 能將 DNA 包裹成帶正電荷的微粒，這些微粒可以黏合到帶有負電荷的細胞表面殘基，并通過胞吞作用進入細胞。一旦進入細胞，胺的質(zhì)子化導致反離子大量涌入以及滲透勢降低，在低pH環(huán)境中實現(xiàn)DNA胞內(nèi)釋放。普遍被接受的觀點是PEI上未質(zhì)子化的胺可以在與膜結(jié)合的細胞器（如溶酶體）中吸收氫離子，這將導致更多氫離子的流入，誘發(fā)滲透溶脹。而質(zhì)子化胺之間的排斥引起PEI構(gòu)象的改變，上述變化導致的滲透膨脹使囊泡釋放聚合物與 DNA 形成的復合物進入細胞質(zhì)。復合物拆解后，DNA 能自由的融合到細胞核中。
PEI轉(zhuǎn)染原理
圖2. PEI轉(zhuǎn)染原理 (選自Current Protocols in Chemical Biology 9:147–157, September 2017)
產(chǎn)品優(yōu)勢
1.轉(zhuǎn)染效率高：適合轉(zhuǎn)染DNA，細胞密度在70%~80%時，轉(zhuǎn)染效率可以達到80%以上；
2.應用范圍廣：既適用于HEK293等真核貼壁細胞的轉(zhuǎn)染 也適用于懸浮細胞的轉(zhuǎn)染，并且適用于有血清和無血清的轉(zhuǎn)染條件。
3.蛋白表達量高： 少量的轉(zhuǎn)染試劑獲得高產(chǎn)量的蛋白表達，性價比高，適用于大規(guī)模的轉(zhuǎn)染。
4.無機試劑，無動物源成分
5.低毒性：轉(zhuǎn)染細胞形態(tài)良好并表達大量的目的蛋白；
6.產(chǎn)品穩(wěn)定，質(zhì)控嚴格；
不同細胞系參考數(shù)據(jù) 以48孔板為例（數(shù)據(jù)僅供參考）
細胞類型
培養(yǎng)體系
轉(zhuǎn)染時細胞匯合度
DNA
Seebio PEI（1mg/mL）
293H
DMEM
70-80%
0.2ug
0.2uL
293FT
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
293E
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
293F
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
COS7
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
hela
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
CaCO2
MEM
70-80%
0.2ug
0.9uL
BHK21
MEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
RAW264.7
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
SW480
IMDM
70-80%
0.2ug
0.6uL
MDCK
DMEM
70-80%
0.2ug
1uL
CHO-K1
IMDM
70-80%
0.2ug
1uL
HepG2
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
A549
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
NIH/3T3
DMEM
70-80%
0.2ug
0.9uL
Vero
DMEM
70-80%
0.2ug
0.9uL
sf9
SIM SF
70-80%
0.2ug
0.9uL
不同培養(yǎng)體系參考值
培養(yǎng)皿
表面積(cm2)
培養(yǎng)基總量
DNA的量(ug)
轉(zhuǎn)染試劑的量(uL)
稀釋液體積(uL)
96孔板
0.3
100uL
0.1
0.3
10
48孔板
0.7
200uL
0.2
0.6
20
24孔板
1.9
500uL
0.5
1.5
50
12孔板
3.8
1mL
1
3
100
6孔板
10
2 mL
2
6
200
25cm2培養(yǎng)瓶
21
4 mL
4
12
400
75cm2培養(yǎng)瓶
58
10 mL
10
30
1000
轉(zhuǎn)染中的常見問題
1.轉(zhuǎn)染效率低
原因：(1)細胞活力：使用活力好傳代小于15代的細胞。
(2)細胞接種密度高/低：適當降低/增加接種密度。
(3)PEI/DNA比率不合適：進行不同基因轉(zhuǎn)染時應對PEI和DNA的比例進行優(yōu)化，以達到合適比例。
(4)質(zhì)粒片段較大：可根據(jù)實際實驗需要調(diào)整，如適當增加轉(zhuǎn)染質(zhì)粒總量等。
(5)混合方式不當：質(zhì)粒DNA和PEI溶液混合時避免渦旋。同時要注意PEI加入 DNA溶液中的順序。
2.細胞毒性高
原因：(1)轉(zhuǎn)染液孵育時間過長：過長時間 PEI/DNA 復合體會導致細胞毒性。
(2)細胞接種密度低：適當增加接種密度。
(3)PEI/DNA比例高：優(yōu)化合適的PEI和DNA的比例。
3.轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定，重復性不好
原因： 轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定一般與兩個因素緊密相關(guān)，一個是轉(zhuǎn)染試劑的穩(wěn)定性，另一個是基因的穩(wěn)定性。轉(zhuǎn)染試劑應按照說明書建議的保存溫度及條件進行保存。溶解后則不建議反復凍融。如短時間內(nèi)連續(xù)使用，可放置于4℃保存。若超過10天不使用，不建議使用。
產(chǎn)品選擇指南
目前西寶生物（Seebio）提供了多種形式的轉(zhuǎn)染試劑，客戶可根據(jù)轉(zhuǎn)染核酸的種類/貼壁細胞/懸浮細胞等條件，選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑。具體選擇指南如下：
產(chǎn)品種類
核酸類型
細胞類型
是否可替換
Seebio?聚乙烯亞胺PEI（Polyethylenimine）轉(zhuǎn)染試劑 (貨號：AJL0940C)
DNA
貼壁細胞
懸浮細胞
可替換lipo3000，jet PEI
線性PEI轉(zhuǎn)染試MW25000(貨號：AJL0115C)
DNA
貼壁細胞
懸浮細胞
可替換PEI 25KTM(23966)
線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(速溶型)MW40000(貨號：AJL0940B)
DNA
貼壁細胞
懸浮細胞
可替換PEI MAX 40K(24765)
訂購信息
即用型
品牌
貨號
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
Seebio
Seebio?聚乙烯亞胺PEI（Polyethylenimine）轉(zhuǎn)染試劑
1ml
10ml
50ml
100ml
粉末非即用型
Seebio
Seebio?線性聚乙烯亞胺，MW40000
10mg
100mg
1g
Seebio
Seebio?線性聚乙烯亞胺， MW25000
1g
相關(guān)產(chǎn)品
平衡鹽及抗生素
品牌
貨號
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
Seebio
Hanks平衡鹽粉劑(1×HBSS,含酚紅)
1L
Seebio
PBS緩沖液
500ml
WAKO
293-72601
D-PBS(-),Powder
1L×10
299-72603
10L
WAKO
Penicillin-Streptomycin Solution（×100）
青霉素-鏈霉素溶液（×100）
100mL
WAKO
Penicillin-Streptomycin Solution（×50）
青霉素-鏈霉素溶液（×50）
100mL
Seebio 293細胞專用培養(yǎng)基
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
產(chǎn)品說明
規(guī)格
SeeHEK293CD01基礎(chǔ)培養(yǎng)基(液體)
(無動物源，化學成分限定,不含水解物，含微量生長因子)
1L
SeeHEK293CD01基礎(chǔ)培養(yǎng)基(干粉)
(無動物源，化學成分限定,不含水解物，含微量生長因子)
10L
100L
SeeHEK293CD02基礎(chǔ)培養(yǎng)基(液體)
(無動物源，化學成分限定,不含水解物和生長因子)
1L
SeeHEK293CD02基礎(chǔ)培養(yǎng)基(干粉)
(無動物源，化學成分限定,不含水解物和生長因子)
10L
100L
SeeHEK293CD03基礎(chǔ)培養(yǎng)基(液體)
原始培養(yǎng)基已經(jīng)含有4mM Gln
1L
SeeHEK293CD03,基礎(chǔ)培養(yǎng)基(干粉)
原始培養(yǎng)基已經(jīng)含有4mM Gln
10L
100L
SeeHEK293FM01補料培養(yǎng)基(液體)
液體補料A含有60g/L的葡萄糖，補料B不含葡萄糖
1L+100ml
SeeHEK293FM01補料培養(yǎng)基(干粉)
液體補料A含有60g/L的葡萄糖，補料B不含葡萄糖
10L+1L
100L+10L
Seebio?條件培養(yǎng)液(293T)
含有細胞分泌物的培養(yǎng)液
10ml
250ml
WAKO BalanCD 無血清細胞培養(yǎng)基
  1. cGMP級別
  2. 可以提供液體及粉末形式
  3. 無血清
  4. 已取得DMF
  5. 化學成分限定
  6. 適應小試劑放大
HEK293系列：基因治療病毒載體生產(chǎn)，蛋白瞬時表達 - 重組蛋白生產(chǎn)
貨號
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
91165-1L
BalanCD HEK293
BalanCD HEK293培養(yǎng)基
1L
94137-10L
10L
94137-100L
100L
91166-500ML
BalanCD HEK293 Feed
BalanCD HEK293補料
500mL
981444-10L
10L
981444-100L
100L
防止細胞結(jié)團
品牌
貨號
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
WAKO

Sodium Dextran Sulfate 5,000
葡聚糖硫酸鈉鹽5,000（生化級）

25g
WAKO
100g
WAKO
500g
WAKO

Sodium Dextran Sulfate 5,000
葡聚糖硫酸鈉鹽5,000（分子級）

25g
WAKO
100g
WAKO
500g
消泡劑
品牌
貨號
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
WAKO

Antifoam SI
消泡劑 SI

100ml
WAKO
500ml
WAKO

Antifoam PE-H
消泡劑 PE-H (參考)在20℃時，粘度約983cP

100ml
WAKO
500ml
WAKO

Antifoam PE-M
消泡劑 PE-M (參考)在20℃時，粘度約325cP

100ml
WAKO
500ml
WAKO

Antifoam PE-L
消泡劑 PE-L (參考)在20℃時，粘度約160cP

100ml
WAKO
500ml
細胞解離
品牌
貨號
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
WAKO
203-20251

Trypsin-EDTA Solution without Phenol Red, AF
胰蛋白酶EDTA溶液（無酚紅）

100ml
WAKO
207-20271

Trypsin-EDTA Solution (High Trypsin) without Phenol Red, AF
胰蛋白酶EDTA溶液（無酚紅）

100ml
WAKO細胞凍存
BAMBANKER 無血清細胞凍存液 用戶文獻眾多
產(chǎn)品編號
英文名稱
應用
規(guī)格
302-14686
BAMBANKER'
常規(guī)工具細胞，干細胞，PBMCs,免疫細胞，類器官等
100mL
306-14684
20mL×5
PRIME-XV 無DMSO 凍存液 無動物源成分，化學成分限定，已取得美國FDA DMF
產(chǎn)品編號
英文名稱
應用
規(guī)格
91140-10ml
PRIME-XVFreezISDMSO free
干細胞
10mL
91140-100ml
100mL
iStock 無血清細胞凍存液 無異源，已取得日本《再生醫(yī)療等制品材料適格性確認書》
產(chǎn)品編號
英文名稱
應用
規(guī)格
385-19451
iStockXeno-Free Freezing medium
人免疫細胞，PBMCs,MSCs,iPS等
120mL

 

CHO細胞和HEK-293細胞常用于哺乳動物瞬轉(zhuǎn)系統(tǒng)中快速生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的蛋白。然而，研究者在利用瞬時轉(zhuǎn)染生產(chǎn)重組蛋白時，通常會遇到蛋白表達量極低，成本高昂且操作復雜不利于放大生產(chǎn)等問題。優(yōu)質(zhì)的轉(zhuǎn)染試劑是通往優(yōu)質(zhì)蛋白生產(chǎn)瞬轉(zhuǎn)平臺的必經(jīng)之路。
自1996年開始陽離子聚合物作為基因轉(zhuǎn)染載體的研究，聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）作為化學轉(zhuǎn)染的新寵，近年來倍受關(guān)注，無論是科研還是在工業(yè)化、大規(guī)模瞬時轉(zhuǎn)染表達重組蛋白或病毒載體領(lǐng)域都是使用廣泛的轉(zhuǎn)染試劑。西寶生物開發(fā)的新一代陽離子聚合物產(chǎn)品著重優(yōu)化和DNA結(jié)合能力。為了更好的了解PEI這款陽離子聚合物產(chǎn)品，本文從PEI的分類，原理，使用及常見問題及產(chǎn)品推薦幾個方面介紹該產(chǎn)品。
PEI的分類
PEI的結(jié)構(gòu)可以寫成是-(CH2CH2NH)n-。根據(jù)合成原料與工藝的差異，產(chǎn)物有支鏈PEI與直鏈PEI的差異，2者在應用上存在比較明顯的偏好。支鏈PEI在力學性、加工性、成膜性、薄膜透光性方面更具有優(yōu)勢，廣泛應用于造紙、石油、輕紡、建筑等領(lǐng)域，而直鏈PEI在真核細胞的基因轉(zhuǎn)染方面更具有優(yōu)勢，已廣泛應用于基因轉(zhuǎn)染方面。
直鏈PEI，應用較廣泛的主要有PEI25000與PEI40000（也有稱PEIMAX），在HEK293和CHO等細胞中轉(zhuǎn)染效率較高。PEI 40000與PEI 25000轉(zhuǎn)染試劑相比，具有很多優(yōu)點。包括：
1.溶解性：PEI 40000較易溶解，可直接在水中溶解，PEI 25000需要先把水調(diào)成弱酸性助其溶解，溶解后再用NaOH把pH調(diào)至中性；
2.操作性：PEI 40000操作簡便，更易于使用，且比PEI 25000的轉(zhuǎn)染效果好；
3.穩(wěn)定性：PEI 25000含有4-11%的丙?；鶜埩?，其能阻止聚合物主鏈與DNA結(jié)合。相較于PEI 25000，PEI 40000是完全脫落的結(jié)構(gòu)，因此其性能始終高效如一。
PEI轉(zhuǎn)染的原理
陽離子聚合物轉(zhuǎn)染的共同原理：聚合物把DNA包裹形成復合物，防止被DNase降解，然后附著在細胞膜上被內(nèi)吞進入胞內(nèi)，破裂釋放后，DNA進入細胞質(zhì)中，從而發(fā)揮一定的功能。陽離子聚合物和陽離子脂質(zhì)體的主要區(qū)別在于其不含疏水部分而完全溶于水，并可以方便地進行化學修飾。
直鏈PEI單體中每3個原子含1個氮，形成胺基。每相隔二個碳原子，即每第三個原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡在pH下都能充當有效的質(zhì)子海綿(proton sponge)體。這是PEI有較強的結(jié)合DNA和黏附細胞，能作為基因轉(zhuǎn)導載體的重要原因。針對這個特點西寶生物開發(fā)的新一代陽離子聚合物產(chǎn)品著重優(yōu)化和DNA結(jié)合能力。
pH值與質(zhì)子化關(guān)系
圖1. pH值與質(zhì)子化關(guān)系（源自：doi.org/10.1021/acs.macromol.0c01501）
PEI 能將 DNA 包裹成帶正電荷的微粒，這些微?？梢责ず系綆в胸撾姾傻募毎砻鏆埢?，并通過胞吞作用進入細胞。一旦進入細胞，胺的質(zhì)子化導致反離子大量涌入以及滲透勢降低，在低pH環(huán)境中實現(xiàn)DNA胞內(nèi)釋放。普遍被接受的觀點是PEI上未質(zhì)子化的胺可以在與膜結(jié)合的細胞器（如溶酶體）中吸收氫離子，這將導致更多氫離子的流入，誘發(fā)滲透溶脹。而質(zhì)子化胺之間的排斥引起PEI構(gòu)象的改變，上述變化導致的滲透膨脹使囊泡釋放聚合物與 DNA 形成的復合物進入細胞質(zhì)。復合物拆解后，DNA 能自由的融合到細胞核中。
PEI轉(zhuǎn)染原理
圖2. PEI轉(zhuǎn)染原理（選自Current Protocols in Chemical Biology 9:147–157, September 2017）
產(chǎn)品優(yōu)勢
1.轉(zhuǎn)染效率高：適合轉(zhuǎn)染DNA，細胞密度在70%~80%時，轉(zhuǎn)染效率可以達到80%以上；
2.應用范圍廣：既適用于HEK293等真核貼壁細胞的轉(zhuǎn)染 也適用于懸浮細胞的轉(zhuǎn)染，并且適用于有血清和無血清的轉(zhuǎn)染條件。
3.蛋白表達量高： 少量的轉(zhuǎn)染試劑獲得高產(chǎn)量的蛋白表達，性價比高，適用于大規(guī)模的轉(zhuǎn)染。
4.無機試劑，無動物源成分
5.低毒性：轉(zhuǎn)染細胞形態(tài)良好并表達大量的目的蛋白；
6.產(chǎn)品穩(wěn)定，質(zhì)控嚴格；
不同細胞系參考數(shù)據(jù) 以48孔板為例（數(shù)據(jù)僅供參考）
細胞類型
培養(yǎng)體系
轉(zhuǎn)染時細胞匯合度
DNA
Seebio PEI（1mg/mL）
293H
DMEM
70-80%
0.2ug
0.2uL
293FT
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
293E
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
293F
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
COS7
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
hela
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
CaCO2
MEM
70-80%
0.2ug
0.9uL
BHK21
MEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
RAW264.7
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
SW480
IMDM
70-80%
0.2ug
0.6uL
MDCK
DMEM
70-80%
0.2ug
1uL
CHO-K1
IMDM
70-80%
0.2ug
1uL
HepG2
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
A549
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
NIH/3T3
DMEM
70-80%
0.2ug
0.9uL
Vero
DMEM
70-80%
0.2ug
0.9uL
sf9
SIM SF
70-80%
0.2ug
0.9uL
不同培養(yǎng)體系參考值
培養(yǎng)皿
表面積(cm2)
培養(yǎng)基總量
DNA的量(ug)
轉(zhuǎn)染試劑的量(uL)
稀釋液體積(uL)
96孔板
0.3
100uL
0.1
0.3
10
48孔板
0.7
200uL
0.2
0.6
20
24孔板
1.9
500uL
0.5
1.5
50
12孔板
3.8
1mL
1
3
100
6孔板
10
2 mL
2
6
200
25cm2培養(yǎng)瓶
21
4 mL
4
12
400
75cm2培養(yǎng)瓶
58
10 mL
10
30
1000
轉(zhuǎn)染中的常見問題
1.轉(zhuǎn)染效率低
原因：(1)細胞活力：使用活力好傳代小于15代的細胞。
(2)細胞接種密度高/低：適當降低/增加接種密度。
(3)PEI/DNA比率不合適：進行不同基因轉(zhuǎn)染時應對PEI和DNA的比例進行優(yōu)化，以達到合適比例。
(4)質(zhì)粒片段較大：可根據(jù)實際實驗需要調(diào)整，如適當增加轉(zhuǎn)染質(zhì)?？偭康取?/div>
(5)混合方式不當：質(zhì)粒DNA和PEI溶液混合時避免渦旋。同時要注意PEI加入 DNA溶液中的順序。
2.細胞毒性高
原因：(1)轉(zhuǎn)染液孵育時間過長：過長時間 PEI/DNA 復合體會導致細胞毒性。
(2)細胞接種密度低：適當增加接種密度。
(3)PEI/DNA比例高：優(yōu)化合適的PEI和DNA的比例。
3.轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定，重復性不好
原因： 轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定一般與兩個因素緊密相關(guān)，一個是轉(zhuǎn)染試劑的穩(wěn)定性，另一個是基因的穩(wěn)定性。轉(zhuǎn)染試劑應按照說明書建議的保存溫度及條件進行保存。溶解后則不建議反復凍融。如短時間內(nèi)連續(xù)使用，可放置于4℃保存。若超過10天不使用，不建議使用。
產(chǎn)品選擇指南
目前西寶生物（Seebio）提供了多種形式的轉(zhuǎn)染試劑，客戶可根據(jù)轉(zhuǎn)染核酸的種類/貼壁細胞/懸浮細胞等條件，選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑。具體選擇指南如下：
產(chǎn)品種類
核酸類型
細胞類型
是否可替換
Seebio?聚乙烯亞胺PEI（Polyethylenimine）轉(zhuǎn)染試劑 (貨號：AJL0940C)
DNA
貼壁細胞
懸浮細胞
可替換lipo3000，jet PEI
線性PEI轉(zhuǎn)染試MW25000(貨號：AJL0115C)
DNA
貼壁細胞
懸浮細胞
可替換PEI 25KTM(23966)
線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(速溶型)MW40000(貨號：AJL0940B)
DNA
貼壁細胞
懸浮細胞
可替換PEI MAX 40K(24765)
訂購信息
即用型
品牌
貨號
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
Seebio
Seebio?聚乙烯亞胺PEI（Polyethylenimine）轉(zhuǎn)染試劑
1ml
10ml
50ml
100ml
粉末非即用型
Seebio
Seebio?線性聚乙烯亞胺，MW40000
10mg
100mg
1g
Seebio
Seebio?線性聚乙烯亞胺， MW25000
1g
相關(guān)產(chǎn)品
平衡鹽及抗生素
品牌
貨號
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
Seebio
Hanks平衡鹽粉劑(1×HBSS,含酚紅)
1L
Seebio
PBS緩沖液
500ml
WAKO
293-72601
D-PBS(-),Powder
1L×10
299-72603
10L
WAKO
Penicillin-Streptomycin Solution（×100）
青霉素-鏈霉素溶液（×100）
100mL
WAKO
Penicillin-Streptomycin Solution（×50）
青霉素-鏈霉素溶液（×50）
100mL
Seebio 293細胞專用培養(yǎng)基
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
產(chǎn)品說明
規(guī)格
SeeHEK293CD01基礎(chǔ)培養(yǎng)基(液體)
(無動物源，化學成分限定,不含水解物，含微量生長因子)
1L
SeeHEK293CD01基礎(chǔ)培養(yǎng)基(干粉)
(無動物源，化學成分限定,不含水解物，含微量生長因子)
10L
100L
SeeHEK293CD02基礎(chǔ)培養(yǎng)基(液體)
(無動物源，化學成分限定,不含水解物和生長因子)
1L
SeeHEK293CD02基礎(chǔ)培養(yǎng)基(干粉)
(無動物源，化學成分限定,不含水解物和生長因子)
10L
100L
SeeHEK293CD03基礎(chǔ)培養(yǎng)基(液體)
原始培養(yǎng)基已經(jīng)含有4mM Gln
1L
SeeHEK293CD03,基礎(chǔ)培養(yǎng)基(干粉)
原始培養(yǎng)基已經(jīng)含有4mM Gln
10L
100L
SeeHEK293FM01補料培養(yǎng)基(液體)
液體補料A含有60g/L的葡萄糖，補料B不含葡萄糖
1L+100ml
SeeHEK293FM01補料培養(yǎng)基(干粉)
液體補料A含有60g/L的葡萄糖，補料B不含葡萄糖
10L+1L
100L+10L
Seebio? 條件培養(yǎng)液(293T)
含有細胞分泌物的培養(yǎng)液
10ml
250ml
WAKO BalanCD 無血清細胞培養(yǎng)基
  1. cGMP級別
  2. 可以提供液體及粉末形式
  3. 無血清
  4. 已取得DMF
  5. 化學成分限定
適應小試劑放大
HEK293系列：基因治療病毒載體生產(chǎn)，蛋白瞬時表達·重組蛋白生產(chǎn)
貨號
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
91165-1L
BalanCD HEK293
BalanCD HEK293培養(yǎng)基
1L
94137-10L
10L
94137-100L
100L
91166-500ML
BalanCD HEK293 Feed
BalanCD HEK293補料
500mL
981444-10L
10L
981444-100L
100L
防止細胞結(jié)團
品牌
貨號
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
WAKO

Sodium Dextran Sulfate 5,000
葡聚糖硫酸鈉鹽5,000（生化級）

25g
WAKO
100g
WAKO
500g
WAKO

Sodium Dextran Sulfate 5,000
葡聚糖硫酸鈉鹽5,000（分子級）

25g
WAKO
100g
WAKO
500g
消泡劑
品牌
貨號
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
WAKO

Antifoam SI
消泡劑 SI

100ml
WAKO
500ml
WAKO

Antifoam PE-H
消泡劑 PE-H (參考)在20℃時，粘度約983cP

100ml
WAKO
500ml
WAKO
Antifoam PE-M 消泡劑 PE-M (參考)在20℃時，粘度約325cP
100ml
WAKO
500ml
WAKO
Antifoam PE-L 消泡劑 PE-L (參考)在20℃時，粘度約160cP
100ml
WAKO
500ml
細胞解離
品牌
貨號
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
WAKO
203-20251

Trypsin-EDTA Solution without Phenol Red, AF
胰蛋白酶EDTA溶液（無酚紅）

100ml
WAKO
207-20271

Trypsin-EDTA Solution (High Trypsin) without Phenol Red, AF
胰蛋白酶EDTA溶液（無酚紅）

100ml
WAKO細胞凍存
BAMBANKER 無血清細胞凍存液 用戶文獻眾多
產(chǎn)品編號
英文名稱
應用
規(guī)格
BAMBANKER'
常規(guī)工具細胞，干細胞，PBMCs,免疫細胞，類器官等
120mL
306-14684
20mL×5
PRIME-XV 無DMSO 凍存液 無動物源成分，化學成分限定，已取得美國FDA DMF
產(chǎn)品編號
英文名稱
應用
規(guī)格
91140-10ml
PRIME-XVFreezISDMSO free
干細胞
10mL
91140-100ml
100mL
iStock 無血清細胞凍存液 無異源，已取得日本《再生醫(yī)療等制品材料適格性確認書》
產(chǎn)品編號
英文名稱
應用
規(guī)格
385-19451
iStockXeno-Free Freezing medium
人免疫細胞，PBMCs,MSCs,iPS等
120mL